10.03.2013
ФЕНОТИП ЛИМФОЦИТОВ
Рубрика: ВетеринарияАвтор: admin
ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОТИПА ЛИМФОЦИТОВ В ЭМБРИОГЕНЕЗЕ
М. Н. ДАНИЛОВА
(Научные руководители профессор А. Д. БЕЛОВ и кандидат биологических наук В. Б. БРОНШТЕЙН) Московская ветеринарная академия
Лимфоциты относятся к ключевым клеткам системы иммунитета. Они могут осуществлять разнообразные иммунологические функции благодаря наличию на поверхности целого ряда специфических рецепторов, которые определяют их функциональные различия и дают возможность идентифицировать разные субпопуляции Т- и В-лимфоцитов, что позволяет использовать их в качестве маркеров этих клеток [3].
Клеточным субстратом лимфопролиферативных заболеваний являются трансформированные клетки иммунной системы. Трансформация нормальной клетки в злокачественную может произойти на любом этапе дифференцировки и созревания [4]. В этой связи нашей задачей было изучить фенотип клеток иммунной системы на разных стадиях эмбриогенеза.
Лейкознотрансформированные клетки, кроме потери способности к дальнейшей нормальной дифференцировке, приобретают способность к безграничному автономному росту. При пролиферации патологического клона происходит накопление клеток с одинаковым или сходным фенотипом.
Изучение поверхностных структур клеток на разных стадиях развития эмбриона и сравнение их с таковыми у больных животных помогут установить, на каких стадиях дифференцировки происходит злокачественная трансформация клеток и какие клоны их при этом затрагиваются, что имеет патогенетическое значение.
Учитывая известный факт, что в эмбриогенезе идет последовательная смена локализации кроветворения, мы для своих исследований выбрали печень и тимус эмбриона крупного рогатого скота. Лимфоидные клетки из этих органов выделяли путем соскоба паренхимы скальпелем в питательную среду № 199.
Взвесь клеток фильтровали через нейлон и центрифугировали в градиенте плотности фиколл-верографина при 2000 30 мин [5]. Клетки собирали из интерфазы пастеровской пипеткой и трижды отмывали физиологическим раствором.
Популяции лимфоцитов маркировали по общепринятым методикам: Т-лимфоциты — спонтанным розеткообразованием с эритроцитами барана [8], разные варианты которого выявляют общие Е+ [10], активные (ранние) Еа+ [9], стабильные (устойчивые к температуре 37 °С) Ез1? [11] розеткообразующие клетки (РОК).
В-лимфоциты тестировали определением рецепторов к С’3-компоненту комплемента — С’3+ [7], к Рс-фрагменту |д—ЕА + [6], к нативным эритроцитам мыши Ем+[12].
Исследования проводили на двенадцати 2,5—4-месячных эмбрионах здорового крупного рогатого скота.
На тимоцитах 2,5-месячного эмбриона присутствуют рецепторы, характерные и для Т-и для В-лимфоцитов нормального здорового животного (Е+С’3+). К 3—3,5 мес часть рецепторов, характерных для В-клеток (С’3+), исчезает, а к 4 мес на них остаются в основном рецепторы, характерные для Т-клеток (Е+),
На лимфоцитах печени 2,5-месячных эмбрионов присутствуют рецепторы Е+ С’З»*», а позже сохраняются эти и появляются новые рецепторы, свойственные и той и другой популяциям лимфоцитов.
Кроме того, исследовали цитохимические свойства субпопуляций лимфоцитов с целью получить представление о цитохимическом их профиле.
Для этого выбрали ферменты кислую фосфатазу (КФ) и неспецифическую эстеразу (НЭ), так как они наиболее стабильны в онтогенезе и не изменяются на всех стадиях развития болезни [2]. Установлено, что НЭ является специфическим маркером клеток Т-ряда крупного рогатого скота [1].
В тимоцитах 2,5-месячного эмбриона с Т-клеточным фенотипом появляется НЭ и, варьируя, четко выявляется в разные периоды эмбриогенеза. В лимфоцитах печени ее обнаруживают в 3,5 мес, но с меньшей активностью. КФ в тимоцитах выявляли в раннем эмбриогенезе, но к 3—3,5 мес ее содержание в лимфоцитах печени, а также в тимоцитах становится незначительным, или она не обнаруживается.
В тимоцитах с В-клеточным фенотипом НЭ выявляли у 2,5-месячных эмбрионов, но к 3—3,5 мес ее активность резко снижалась. В лимфоцитах печени у 3,5—4-месячных эмбрионов КФ определяли менее чем в 10 % клеток.
Заключение.
Фенотип тимоцитов в раннем эмбриогенезе характеризуется наличием рецепторов для Т- и В-лимфоцитов. С 3,5-месячного возраста начинается специализация клеток в сторону Т-лимфоцитов с потерей рецепторов, характерных для В-клеток.
Сохранение лимфоцитами печени фенотипа Е+С’3+ на протяжении всего периода наблюдений свидетельствует о продукции этим органом неспециализированных клеток. У животных бета хгч при беременности не вырабатывается.
В тимоцитах выявляется НЭ, но уровень ее активности связан со степенью зрелости лимфоидных клеток, а КФ малоактивна или не выявляется. В лимфоцитах печени оба фермента обнаруживаются в 3,5—4-месячном возрасте менее чем у 10 % клеток.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бронштейн В. Б., Данилова М. Н., Крикун В. А.— В сб.: Лейкозы крупного рогатого скота, М.( МВА, 1985. 2. Глузман Д. Ф.— Наукова думка, Киев, 1978. 3. Петров Р. В.— Иммунология и иммуногенетика, М., Медицина, 1976. 4. Пунчук В. Г., Глузман Д. Ф., Сидоренко С. П.— Экспериментальная онкология, 1983, 5. 5. Тамашюнас В. И., Дикенене Н. П., Бражюнене Б. А.
— Исследование поверхностных структур лимфоидных клеток и разделение популяций лимфоцитов крупного рогатого скота (методические рекомендации), Вильнюс, 1982. 6. Basten, Miller, Sprent, Pye—J. Exp. Med., 1972, 3. 7. Bianco, Patrick, Nussenzweig— J. ExpMed., 1970, 4. 8. Jondal, Holm, Wigzell— J. Exp. Med., 1972, 2. 9. Felsburg, Edelman, Gil-man — J. Immunol., 1976, 4. 10. Florey, Peetoom — J. Immunol. Meth., 1976, 3—4. 1 1. Katoh, Charoensi-ri — J. Immunol., 1977, 6. 12. Stathopoulos, Elliot — Lancet, 1974, 1.
Вас также заинтересует это:
Comments (0)
Комментариев нет
Нет комментариев.
