Лечим по-человечески!
(067) 986-29-64 (050) 520-06-76(093) 466-02-12
ДОМИНАНТА
ОЗВЕРЕВШИЕ ЦЕНЫ
Контакты
Лечение пироплазмоза
Лицензия
 

Получить совет!

Чугуевская ветклиника "Ласка"


 

23.10.2013

ВЫДЕЛЕНИЕ ЛИМФОЦИТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ

Рубрика: Ветеринария
Автор: admin


ВЫДЕЛЕНИЕ ЛИМФОЦИТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ

Всесоюзный ГНКИ ветпрапаратов

Методы фракционирования лимфоцитов Л. В. Кейсевич и соавт. («Врачебное дело», 1979, № 12, с. 66—69) разделяют на следующие группы:

выделение мононуклеарных клеток в градиенте плотности;

выделение лимфоцитов физическими методами, включающими специфическую и неспецифическую адсорбцию на колонках, электрофорез; механическая сортировка; применение комбинированных методов.

Использование того или иного метода определяется целью работы. Задачей наших исследований было изучение возможности выделения лимфоцитов из крови животных в градиенте плотности.

Для приготовления разделяющей жидкости были взяты 6%-ный растворчик полиглюкина и 76%-ный раствор верографииа отечественного производства. Смесь готовили из 8 частей полиглюкина и 2 частей верографина.

В качестве, контроля использовали смесь 12 частей фикола (9 %-ного раствора) производства Швеции и 5 частей верографина (39 %-и’ого раствора) фирмы «Дифко». Плотность смесей доводили до 1,077—1,080 г/мл физиологическим раствором с рН 7. Кроме того, в опытах использовали стандартную разделяющую жидкость «Лимфолреп» производства Норвегии.

Лимфоциты выделяли из периферической крови лошади, коровы, овцы, козы, свиньи, собаки, кошки, норки, тхорзофретки и песца. Объем исследуемой крови во всех случаях составил 3 мл. Для предотвращения свертывания крови использовали гепарин по 20 ед/мл.

После взятия кровь разбавляли в два раза физиологическим раствором и осторожно наслаивали на разделяющую жидкость в центрифужной пробирке. Центрифугировали (Т-24) при 20(Ю об/мин в течение 15 мин при 18—20 °С.

После центрифугирования над слоем разделяющей жидкости обнаруживали кольцо беловатого цвета, которое представляет собой скопление лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов. Эти клетки осторожно отсасывали шприцем. На дне пробирки оставались эритроциты и гранулоциты.

До центрифугирования и после получения лимфоцитарной суспензии подсчитывали общее число лейкоцитов, выводили лейкоформулу, определяли количество лимфоцитов в исследуемых пробах, рассчитывали процент выхода лимфоцитов после центрифугирования. Жизнеспособность клеток определяли, окрашивая их 1 %-ным раствором трипановой сини.

Результаты исследований приведены в таблице.

Выход лимфоцитов после центрифугирования

Вид животного

Количество лимфоцитов в крови, тыс/мм1 (М±m)

Выход лимфоцитов, % (М±m)

полиглюкин — верографин

фикол — верографин «Лимфопреп»
Лошадь

6,27±0,72

87,9±5,7

88,1 ±4,4 85,6±3,7
Корова

5,51 ±0,62

79,8±3,2

80,2±4,1 80,7±5,1
Овца

8,72±0,83

84,2±4,0

85,4±4,1 84,6±5,1
Коза

10,34±1,12

77,2±4,2

79,1 ±6,0 78,3±2,8
Свинья

7,14±0,96

82,2±4,5

85.2±4,2 83,2±4,3
Кролик

4,73±0,38

79,7±5,1

78,2±3,1 78,6±2,8
Собака

3,28±0,32

83,9±3,4

80,1 ±3,6 81,1 ±4,2
Кошка

4,16±0,45

72,3±5,4

74,2±4,7 73,1 ±3,1
Норка

3,52±0,40

76,5±6,2

76.1 ±4,4 75,6±2,8
Тхорзофретка

3,22±0,28

70.1 ±8,1

72,5±4,3 73,2±3,7
Песец

3,72±0,65

84,4±4,8

82.2±2,2 82,4±2.6

 

Они говорят о том, что выделение лимфоцитов из крови животных в градиенте плотности смеси полиглюкин — верографин вполне приемлемый метод. Выход лимфоцитов у животных разных видов колеблется от 70 до 90 %.

В получаемой суспензии 80—90 % мононуклеарных клеток приходится на лимфоциты, 8—17 % — на моноциты, 2—3 % — на гранулоциты. Жизнеспособность выделенных клеток составляет 98— 100 %, соотношение эритроцитов и лимфоцитов в лимфоцитарной суспензии 1:10—3:10. Во всех случаях отмечали сравнительно низкий выход лимфоцитов у плотоядных.

Существенной разницы при выделении лимфоцитов различных видов животных на полиглюкине—г-верографине, фиколе — верографине и стандартной разделяющей среде «Лимфолреп» не было отмечено.

Выделенные лимфоциты после однократного отмывания в среде 199 использовали для постановки реакций спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана и бласт трансформации.

Он дает также возможность одновременно получать из крови и гранулоциты. Использование отечественных ингредиентов для приготовления разделяющей жидкости делает метод более доступным.



Вас также заинтересует это:
Comments (0)

Комментариев нет

Нет комментариев.

Добавить комментарий

*




Добавить объявление/Задать вопрос/Доска объявлений/Ветеринария/Карта сайта/Контакты
Схема проезда
Карта Чугуева
Время работы:
пн-пт с 08 до 18
сб-вс с 08 до 14

  • Рубрики

  • Адепты клиники:

  • Страницы

  • Вход на сайт



  •