23.10.2013
ВЫДЕЛЕНИЕ ЛИМФОЦИТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ
Рубрика: ВетеринарияАвтор: admin
ВЫДЕЛЕНИЕ ЛИМФОЦИТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ
Всесоюзный ГНКИ ветпрапаратов
Методы фракционирования лимфоцитов Л. В. Кейсевич и соавт. («Врачебное дело», 1979, № 12, с. 66—69) разделяют на следующие группы:
выделение мононуклеарных клеток в градиенте плотности;
выделение лимфоцитов физическими методами, включающими специфическую и неспецифическую адсорбцию на колонках, электрофорез; механическая сортировка; применение комбинированных методов.
Использование того или иного метода определяется целью работы. Задачей наших исследований было изучение возможности выделения лимфоцитов из крови животных в градиенте плотности.
Для приготовления разделяющей жидкости были взяты 6%-ный растворчик полиглюкина и 76%-ный раствор верографииа отечественного производства. Смесь готовили из 8 частей полиглюкина и 2 частей верографина.
В качестве, контроля использовали смесь 12 частей фикола (9 %-ного раствора) производства Швеции и 5 частей верографина (39 %-и’ого раствора) фирмы «Дифко». Плотность смесей доводили до 1,077—1,080 г/мл физиологическим раствором с рН 7. Кроме того, в опытах использовали стандартную разделяющую жидкость «Лимфолреп» производства Норвегии.
Лимфоциты выделяли из периферической крови лошади, коровы, овцы, козы, свиньи, собаки, кошки, норки, тхорзофретки и песца. Объем исследуемой крови во всех случаях составил 3 мл. Для предотвращения свертывания крови использовали гепарин по 20 ед/мл.
После взятия кровь разбавляли в два раза физиологическим раствором и осторожно наслаивали на разделяющую жидкость в центрифужной пробирке. Центрифугировали (Т-24) при 20(Ю об/мин в течение 15 мин при 18—20 °С.
После центрифугирования над слоем разделяющей жидкости обнаруживали кольцо беловатого цвета, которое представляет собой скопление лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов. Эти клетки осторожно отсасывали шприцем. На дне пробирки оставались эритроциты и гранулоциты.
До центрифугирования и после получения лимфоцитарной суспензии подсчитывали общее число лейкоцитов, выводили лейкоформулу, определяли количество лимфоцитов в исследуемых пробах, рассчитывали процент выхода лимфоцитов после центрифугирования. Жизнеспособность клеток определяли, окрашивая их 1 %-ным раствором трипановой сини.
Результаты исследований приведены в таблице.
Выход лимфоцитов после центрифугирования
| Вид животного |
Количество лимфоцитов в крови, тыс/мм1 (М±m) |
Выход лимфоцитов, % (М±m) | ||
|
полиглюкин — верографин |
фикол — верографин | «Лимфопреп» | ||
| Лошадь |
6,27±0,72 |
87,9±5,7 |
88,1 ±4,4 | 85,6±3,7 |
| Корова |
5,51 ±0,62 |
79,8±3,2 |
80,2±4,1 | 80,7±5,1 |
| Овца |
8,72±0,83 |
84,2±4,0 |
85,4±4,1 | 84,6±5,1 |
| Коза |
10,34±1,12 |
77,2±4,2 |
79,1 ±6,0 | 78,3±2,8 |
| Свинья |
7,14±0,96 |
82,2±4,5 |
85.2±4,2 | 83,2±4,3 |
| Кролик |
4,73±0,38 |
79,7±5,1 |
78,2±3,1 | 78,6±2,8 |
| Собака |
3,28±0,32 |
83,9±3,4 |
80,1 ±3,6 | 81,1 ±4,2 |
| Кошка |
4,16±0,45 |
72,3±5,4 |
74,2±4,7 | 73,1 ±3,1 |
| Норка |
3,52±0,40 |
76,5±6,2 |
76.1 ±4,4 | 75,6±2,8 |
| Тхорзофретка |
3,22±0,28 |
70.1 ±8,1 |
72,5±4,3 | 73,2±3,7 |
| Песец |
3,72±0,65 |
84,4±4,8 |
82.2±2,2 | 82,4±2.6 |
Они говорят о том, что выделение лимфоцитов из крови животных в градиенте плотности смеси полиглюкин — верографин вполне приемлемый метод. Выход лимфоцитов у животных разных видов колеблется от 70 до 90 %.
В получаемой суспензии 80—90 % мононуклеарных клеток приходится на лимфоциты, 8—17 % — на моноциты, 2—3 % — на гранулоциты. Жизнеспособность выделенных клеток составляет 98— 100 %, соотношение эритроцитов и лимфоцитов в лимфоцитарной суспензии 1:10—3:10. Во всех случаях отмечали сравнительно низкий выход лимфоцитов у плотоядных.
Существенной разницы при выделении лимфоцитов различных видов животных на полиглюкине—г-верографине, фиколе — верографине и стандартной разделяющей среде «Лимфолреп» не было отмечено.
Выделенные лимфоциты после однократного отмывания в среде 199 использовали для постановки реакций спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана и бласт трансформации.
Он дает также возможность одновременно получать из крови и гранулоциты. Использование отечественных ингредиентов для приготовления разделяющей жидкости делает метод более доступным.
Вас также заинтересует это:
Comments (0)
Комментариев нет
Нет комментариев.
