17.07.2012
ИНТЕРФЕРОН НА ЖИВОТНЫХ
Рубрика: ВетпрепаратыАвтор: admin
ИСПЫТАНИЕ ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА НА ЖИВОТНЫХ
А. В. СЕЛИВАНОВ, Л. Е. БОЯРИНЦЕВ, К. Н. ГРУЗДЕВ
Всесоюзный ГНКИ ветпрепаратов
Неспецифический фактор противовирусной защиты — интерферон, обладающий широким спектром противовирусного действия, привлекает к себе все более пристальное внимание. Различают пассивную интерферонизацию, когда организм насыщают экзогенным, полученным в другой системе, гомологичным интерфероном, и активную, когда при помощи различных стимуляторов (индукторов) в организме индуцируют выработку собственного эндогенного интерферона. Одновременно стимулируются другие механизмы специфической и неспецифической резистентности (Ф. И. Ершов, А. С. Новохатский, 1980).
Насчитывается более 100 индукторов интерферона. Имеются экспериментальные данные о защитном противовирусном действии индукторов интерферона различного происхождения, полученные на лабораторных животных (А. С. Садыков, 1978; В. Д. Соловьев, Т. А. Бектимиров, 1981). Исследований по применению в ветеринарии индукторов интерферона невирусной природы в отечественной литературе не имеется.
В качестве индукторов, интерферона мы использовали дсРНК, полигуацил, левамиздл (декарис), тилорон, госсипол.
Основным требованием, предъявляемым к существующим индукторам интерферона, является их безвредность. Использованные препараты при соответствующих дозах и методах введения оказались безвредными для кроликов, поросят и песцов.
Температурной реакции у животных на введение индукторов не было. Гематологическими исследованиями через различные промежутки времени каких-либо существенных изменений в крови не установили; биохимические исследования сывороток крови поросят после однократного введения дсРНК показали недостоверное перераспределение белковых фракций.
Видимых изменений во внутренних органах и тканях кроликов, поросят и песцов в ответ на введение препаратов не выявили. При гистологическом исследовании внутренних органов поросят и песцов отклонений в их микроструктуре от нормальной не наблюдали.
Один из критериев оценки эффективности стимуляторов интерфероногенеза — определение количества интерферона в сыворотке крови животных. Было установлено, что дсРНК стимулировал у кроликов выработку интерферона в высоких титрах, уровень которых зависел от дозы и серии препарата. Максимальная продукция интерферона — 1280 ед/мл отмечена через 6 ч после введения индуктора в дозе 0,5—1 мг/кг массы тела со снижением через 24—48 ч.
Тилорон и левамизол индуцировали сывороточный интерферон у кроликов при пероральном применении в дозе 5—10 мг/кг массы тела. В наших опытах тилорон оказался менее эффективным, а титр интерферона после введения левами-зола достигал 320—640 ед/мл.
Ингибитор сыворотки крови поросят, полученный после введения индукторов, отвечал основным требованиям, предъявляемым к интерферону: не разрушался после прогревания при 56 °С, был устойчив к действию кислой среды и неустойчив к действию трипсина.
Внутримышечное введение поросятам дсРНК и полигуацила вызывало раннюю продукцию эндогенного сывороточного интерферона. Максимальные титры его отмечены через 4—6 ч после введения препаратов в дозе 1 мг/кг — соответственно 80—160 и 160—320 ед/мл. Через 24—48 ч содержание интерферона резко снижалось, через 72 ч он не выявлялся.
При сравнительном титровании в двух различных клеточных системах сывороточного интерферона, полученного после введения поросятам дсРНК, оказалось, что антивирусная активность его в отношении вируса везикулярного стоматита была различной. Гомологичная культура клеток оказалась более чувствительной по сравнению с гете-рологичной, что свидетельствует о видоспе-цифичности интерферона.
При многократном применении дсРНК (ежедневно в течение недели) у поросят отмечено явление гипореактивности: после 3-й инъекции титры интерферона снижались на 1—2 logo, минимальный уровень их отмечали после 4-й инъекции препарата. В последующие сутки уровень интерферона в сыворотке крови поросят постепенно восстанавливался.
Препарат дсРНК явился высокоактивным индуктором интерферона и для пушных зверей. У щенков песцов он стимулировал выработку интерферона в титре 160— 320 ед/мл через 6 ч как при внутривенном, так и при внутримышечном введениях в дозе 0,5—2,0 мг/кг. Уровень интерферона зависел и от дозы индуктора.
Противовирусную активность индукторов изучали на модели болезни Ауески (БА). Все препараты обладали выраженным противовирусным действием при введении белым мышам с профилактической целью; лечебное действие индукторов при болезни Ауески малоэффективно. В опытах на мышах были отработаны оптимальные дозы и схемы введения индукторов при данной инфекции.
Защитное действие низкомолекулярных препаратов (тилорана, левамизола и госси-пола) в примененных нами дозах и схемах введения было более слабым по сравнению с высокомолекулярными препаратами (дсРНК, полигуацил).
Несмотря на особую видовую чувствительность кроликов к болезни Ауески, внутримышечное введение им дсРНК, полигуацила или левамизола в дозах соответственно 3, 2,5, 15 мг/кг за 4 ч до заражения предохраняло от летальной дозы вируса, которая равнялась 2 ЛД50. Каждый препарат вводили 3 кроликам, одна группа служила контролем — препаратов не получала. Об эффективности их применения судили по выживаемости и продолжительности жизни животных.
На 6—9-й день после заражения все кролики контрольной группы пали с характерными клиническими признаками болезни Ауески. К 12-му дню в группах, где вводили дсРНК и полигуацил, пало по одному животному.
У выживших признаки заболевания отсутствовали. Получавшие левамизол все остались живы. Определенный противовирусный эффект левамизола проявлялся и при заражении кроликов вирусом в дозе 10 ЛД50, что выражалось в удлинении продолжительности жизни подопытных животных по сравнению с контрольными на 3—5 дней.
Для определения противовирусной активности дсРНК и полигуацила относительно возбудителя болезни Ауески при заражении им поросят подобрали 7 групп 3—4-месячных животных, не вакцинированных против болезни Ауески. Поросятам первых трех групп внутримышечно вводили дсРНК, следующих трех — полигуацил в дозах соответственно 2,5 и 2 мг/кг за 12, 6 и 2 ч до заражения. Животные 7-й группы служили контролем. Поросят всех групп заражали интраназально вирулентным штаммом ВБА в дозе 1000 ТЦД50.
У поросят, обработанных препаратами за 6 ч до заражения, из клинических признаков болезни отмечали серозный ринит. Павших в этих группах не было. В других группах как опытных, так и контрольной на 3—5-й день после заражения развивался серозный ринит, повышалась температура тела, позже появились клинические признаки поражения органов дыхания (хрип, кашель). В контрольной группе все поросята пали, в других группах пало по одному. Выжившие животные значительно отставали в развитии. При анализе гематологических показателей отмечена повышенная реактивность кроветворной системы.
И в опыте на песцах дсРНК обладал выраженной противовирусной активностью в отношении возбудителя БА. В дозе 2,5 мг/кг он защищал от летальной дозы вируса, равной 2,5 ЛД50. Тилорон и левамизол обладали более слабым защитным эффектом. После их введения и последующего (через сутки) заражения отмечали лишь удлинение инкубационного периода и средней продолжительности жизни животных опытных групп по сравнению с контрольными. Препарат госсипол оказался неэффективным.
В опыте на кроликах изучали активность дсРНК и полигуацила в отношении вирусов миксомы и фибромы Шоупа при внутрикожном введении этих вирусов. Внутримышечное введение дсРНК в дозе 3 мг/кг за 4 ч до заражения снижало репродукцию вируса миксомы на 2—2,51д, а вируса фибромы — на 1—1,51д.
В опыте на мышах с использованием синегнойной палочки было показано, что левамизол при пероральном и внутрибрюшин-ном введениях повышает уровень неспецифической резистентности, а также обладает иммуностимулирующим свойством при введении одновременно с инактивированной вакциной против псевдомоноза. Подобными свойствами обладал и препарат диэтил-дитиокарбамат натрия — производное левамизола, противовирусная и иммуностимулирующая активность которого зависела от дозы препарата.
Изучение иммуностимулирующего действия дсРНК на мышах показало, что введение препарата до вакцинации инактивированной вакциной против болезни Ауески не оказывало стимулирующего влияния на формирование иммунитета. Стимулирующий эффект проявлялся при одновременном введении индуктора и вакцины, или при введении индуктора после иммунизации, и выражался в повышении процента защиты животных в опытной группе по сравнению с контрольной, где вводили одну вакцину.
Препараты дсРНК, полигуацил и левамизол при одновременном введении с инактивированной вакциной против болезни Ауески в испытанных нами дозах защищали кроликов от последующего заражения вирусом в дозе 5 ЛД5о, в то время как одна вакцина без индуктора не предохраняла всех животных от летального исхода.
Определение в опыте на песцах влияния дсРНК на гуморальный иммунитет при введении с инактивированной вакциной против болезни Ауески показало, что введение препарата за сутки до вакцинации не влияло на выработку антител, одновременное же — индуктора и вакцины стимулировало процесс иммуногенеза и уровень антител был на 1 logs выше, чем у получавших одну вакцину.
Отмечено влияние дсРНК и на клеточный иммунитет. Эндогенный интерферон, образовавшийся в результате введения индуктора, уже через 6 ч после инъекции последнего усиливал фагоцитарную активность и соответственно поглотительную способность сегментоядерных нейтрофилов крови на 20 %, что по времени совпадало с увеличением уровня интерферона в сыворотке крови песцов.
Заключение. Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод о перспективности использования интерферона и его индукторов для профилактики и лечения вирусных болезней животных.
Вас также заинтересует это:
Comments (0)
Комментариев нет
Нет комментариев.
