10.03.2013

ВЫЯСНЕНИЕ КОНТАМИНАЦИИ ВЛКРС

Рубрика: КРС
Автор: admin

ВЫЯСНЕНИЕ КОНТАМИНАЦИИ ВЛКРС СПЕРМЫ И КРОВИ БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ ИЛИ СЕРОПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ БЫКОВ

Р. С. МОСКАЛИК, Л. Е. ЖУЦКАЯ, Г. К. АГОП, Е. Б. ШЕВЧЕНКО Молдавский НИИЖиВ

Относительно инфицированности спермы быков вирусом лейкоза (ВЛКРС) сведения разноречивы. Одни исследователи утверждают наличие [10, 11], другие — отсутствие его в семени больных лейкозом быков-производителей [5, 7, 9]. Высказывалось мнение, что ВЛКРС выделяется со спермой не постоянно, а через определенные периоды времени

В связи с практической важностью этого вопроса нашей задачей было выяснить контаминацию инфекционным ВЛКРС крови и спермы быков-производителей, больных лейкозом и только положительно реагирующих в РИД с лейкозным антигеном, полученных в разные периоды (месяцы) года.

Материалы и методы. Исследовали сперму и кровь одних и тех же семи быков-производителей, среди которых два были больны лейкозом и пять не имели клинических и гематологических изменений, но положительно реагировали в РИД с антигеном ВЛКРС.

Сперму использовали замороженную в жидком азоте при —196 °С. В качестве контроля исследовали кровь от двух не реагировавших в РИД бычков.

Кровь брали из яремной вены в стерильные пробирки с 10 %-ным раствором ЭДТА. Ее вводили подопытным животным или готовили лейкоконцентрат путем гипотонического шока и вводили только лейкоциты. Подопытными были 10 ягнят 3-месячного возраста цигайской породы, отрицательно реагирующие в РИД до начала опыта.

По 100—280 доз спермы (в 1 дозе 10— 12 млн. спермиев), полученной в январе, марте, мае и июле, а также кровь или лейкоконцентрат в дозе 20—100ХЮ6 лимфоцитов вводили опытным животным внутрибрюшин-но и через каждые 2 нед в течение 5 мес, а затем ежемесячно у них брали кровь и сыворотку исследовали в РИД на наличие антител к ВЛКРС.

Реакцию иммунодиффузии ставили в 0,8 %-ном агаровом геле, приготовленном на трис-буфере (рН 7,2), согласно ГОСТ 2538—82, с двойным лейкозным антигеном (ГП-70 и П-24), который получали в лаборатории лей-коза MBA, и положительной сывороткой от животных, больных лейкозом.

Гематологические исследования проводили согласно тому же ГОСТу. Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали на счетчике «Пикаскель», гемоглобин — с помощью гемоглобинометра ГС-3. Лейкоцитарную формулу определяли после приготовления, фиксации и окраски мазков по методу Романовского—Гимзы.

Внутренние паренхиматозные и кроветворные органы (костный мозг, селезенку, печень, почки, сердце, лимфатические узлы головы, грудной и брюшной полостей) убитых в ходе опыта овец исследовали гистологически. Готовили парафиновые срезы и окрашивали их гематоксилином-эозином.

Результаты исследований. Через 14 и 30 дней сыворотка крови трех ягнят дала положительную реакцию с антигеном ГП-70, что свидетельствовало о появлении антител к специфическому антигену вируса лейкоза (табл. 1). Через 30 дней после заражения титр антител составил 1:2—1:4. В дальнейшем уровень антител повышался до 1:16— 1:32.

Титр их был выше у баранчика № 06606, зараженного лейкоконцентратом: через 48 дней — 1:8, 62 дня — 1:16, 6 мес — 1:32, еще через 5 мес — 1:64. На таком уровне он удерживался в течение 10 мес (срок наблюдения).

Сыворотка крови барана № 00805, которому ввели кровь от двух здоровых серонегативных бычков, в течение всего периода опыта не реагировала в РИД с антигенами ВЛКРС. Следует отметить, что сыворотки крови животных доноров и реципиентов реагировали в РИД только с антигеном ГП-70.

У животных (№ 06565, 06604, 06288, 06747), которым инокулировали по 100—280 доз спермы больных лейкозом или только реагировавших в РИД быков-производителей, в течение всего периода опыта в сыворотках крови антитела к ВЛКРС обнаружить не удалось. Следовательно, сперма, взятая в различное время года от больных и реагировавших в РИД быков, не содержала инфекционного вируса лейкоза.

Спустя 6 мес после инокуляции спермы ягнятам и получения отрицательных результатов двум из них (№ 06565 и 06288) ввели нативную (содержащую ВЛКРС) кровь от положительно реагирующих в РИД быков-про-изводителей. Через 14 дней у того и другого выявили антитела, что свидетельствует о высокой видовой чувствительности овец к ВЛКРС при внутрибрюшинном его введении.

Исследование крови подопытных овец показало, что у инфицированных и неинфицированных ВЛКРС имели место лишь некоторые сезонные колебания гематологических показателей. У инфицированных отмечали нарастание общего количества лейкоцитов от 8,5+0,3 тыс/мкл в марте до 1 2,7+0,2 тыс/мкл в июле (Р>0,05—0,001), в сентябре и октябре оно снижалось (табл. 2). У инфицированных животных отмечены более выраженные индивидуальные изменения в количественном и качественном составе клеток периферической крови.

У барана № 06606 установлено временное повышение уровня лейкоцитов до 16,3 тыс/мкл и 78 % лимфоцитов, у барана № 06224 соответственно до 12 тыс/мкл и 81 %. У этих животных и некоторых других периодически появлялись двуядерные клетки и пролимфоциты.

Таким образом, в течение 1,5 лет после внутрибрюшинного введения крови больных и реагирующих в РИД быков у овец развивалась онковирусная инфекция с незначительными изменениями в крови, указывающими на иммунологическую перестройку в организме животных.

Клинически выраженных отклонений от нормы не было. Поскольку для гематологического и опухолевого проявления лейкоза у овец требуется более 3—7 лет [3, 4], двух инфицированных животных оставили под наблюдением.

Таблица 1
Результаты опыта по введению ягнятам спермы или крови больных лейкозом и положительно реагирующих в РИД с антигеном ВЛКРС здоровых быков

Примечание. ЛКП лейкоконцентрат РИД-положительного быка; СБ — сперма больного лейкозом; СП — сперма РИД-положительного; КБ — кровь больного лейкозом; КП — кровь РИД-положительного; КО — кровь РИД-отри- цательного; К — контроль

 

Остальных баранов убили, и материал от них исследовали гистологически. Изменений, характерных для лейкоза, не обнаружили.
Полуторалетний опыт на овцах показал, что сперма быков, больных лейкозом или только положительно реагирующих в РИД, не содержит инфекционного вируса лейкоза. Кровь этих же животных спустя 14—30 дней после инокуляции экспериментальным ягнятам вызывала в 100% случаев инфицирование их ВЛКРС.

Не подтвердилось и предположение о выделении ВЛКРС со спермой не постоянно, а через определенные промежутки времени. Вирус лейкоза не обнаружили в сперме, взятой от быков в разное время года (январь, март, май, июль) и введенной опытным овцам в количествах, превышающих в 15—20 раз общий объем спермы, используемый для осеменения одной коровы.

Горизонтальная передача ВЛКРС у крупного рогатого скота легко осуществима при совместном содержании животных [6, 8, 13], что подтверждается значительной инфицированностью взрослого скота, достигающей 50—80 % и более [12], однако заболеваемость животных в 8—10 раз меньше [2], то есть лейкомогенный процесс развивается на фоне иммунодефицита врожденного (наследственная предрасположенность) или приобретенного под воздействием различных факторов внешней среды, но только в зараженном ВЛКРС организме.

На современном уровне изученности вопроса речь идет о наследственной предрасположенности к болезни, которая реализуется при совпадении упомянутых факторов. Отсутствие одного из них, например иммунодефицита, даже у зараженных ВЛКРС животных не приводит к развитию лейкоза.

Имеет место только состояние вирусоносительства, не влияющее на здоровье и продуктивность животных. В то же время они представляют опасность (источник вируса лейкоза) для контактирующего с ними, свободного от ВЛКРС скота и поэтому должны быть своевременно изолированы, а затем заменены неинфицированными животными.

Таблица 2

Гемограмма овец, инфицированных и свободных от ВЛКРС

Примечание. Н.И.— не исследовали.

Несмотря на высокую чувствительность овец к ВЛКРС в эксперименте, в естественных условиях инфицированность их незначительна [1]. Это наблюдение подтверждается и нашими данными. Свободные от ВЛКРС овцы, в течение 19 мес находившиеся в тесном контакте с овцами, инфицированными ВЛКРС, не заразились от них.

Следует отметить, что за время опыта у всех животных брали кровь (с соблюдением правил) из яремной вены более 20 раз и механического переноса вируса, а следовательно, и перезаражения не произошло.

На внутрибрюшную инокуляцию лейкоконцентрата иммунный ответ организма ягнят был в 2—4 раза сильнее, чем на введение крови, что проявилось разницей в титрах противовирусных антител в сыворотке крови.

На наш взгляд, такие различия в иммунном ответе можно объяснить ингибирующим действием на вирус лейкоза специфических антител, имеющихся в нативной крови, и отсутствием их в лейкоконцентрате в результате многократного промывания при проведении гипотонического шока.

Заключение. Длительная (19 мес) биопроба на овцах показала, что сперма быков-производителей, больных лейкозом и только положительно реагирующих в РИД, взятая в различные периоды года (январь, март, май, июль), не содержит инфекционный ВЛКРС.

Нативная кровь или лейкоконцентрат тех же животных во всех случаях вызывали инфицирование ягнят ВЛКРС. Антитела у последних появлялись через 14—30 дней после инокуляции ИМ 20-100Х106 лимфоцитов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Вурба Л. Г., Кунаков А. А.— Диагностика лейкозов сельскохозяйственных животных. М., 1983. 2. Москалик Р. С. и соавт.— Сельское хозяйство Молдавии, 1985, 4, 33. 3. Смирнов П. Н. и соавт. В сб.: Профилактика гемобластозов крупного рогатого скота. Новосибирск, 1983. 4. Шиков А. Т.— В сб.: Проблемы экспериментальной онкологии и лейкозов человека и животных.

М., 1979. 5. Шишков В. П. и соавт.— В сб.: Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии. Казань, 1980. 6. Buxton et al.— Can. Сотр. Med., 1984, 365—369. 7. Eaglesome et al.— Vet. Record., 1982, 6. 8. Ferrer—Cancer. Rec., 1976, 851. 9. Kaja et al.— Theriology, 1982, 19. 10. Lucas et al.— Vet. Res., 1986. 160. 11. Mammericks — Ann. Med. Vet., 1985, 129. 12. Onuma et al.— J. Campar. The rap., 1979, 89. 13. Piper et al.— J. Nath. Cancer. Inst., 1979, 62.

Вас также заинтересует это:

Comments (0)

Комментариев нет

Нет комментариев.

Добавить комментарий

Имя (required)

Е-маил (required)

Сайт