05.05.2015
ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР НА ЖИДКИХ СРЕДАХ
Рубрика: МикромирАвтор: admin
Методы высева на чашки дают обычно удовлетворительные результаты при выделении бактерий и грибов, так как подавляющее большинство этих организмов хорошо растет на твердых средах.
Однако пока не удается успешно культивировать на твердых средах некоторые виды бактерий с более крупными клетками; многие простейшие , да и водоросли также могут произрастать лишь в жидкой среде.
Хотя в последние годы для выделения вирусов применяются методы высева из чашки, многие вирусы гораздо легче выделить, используя при этом жидкие среды. Конечно, здесь никогда не получают чистой культуры, так как вирусы — облигатные внутриклеточные паразиты. В этом случае цель заключается в получении двухкомпонентной культуры, состоящей из определенного вируса и его биологического хозяина.
МЕТОД РАЗВЕДЕНИЙ
Наиболее простенький способ получения чистых культур в жидких средах — это метод разведений. Инокулях последовательно (!) разводят стерильной средой и аликвотами из каждого разведения засевают огромное число пробирок со средой.
Цель этой операции — инокулировать ряд пробирок настолько разведенной взвесью микробов, чтобы вероятность внести в данную пробирку даже одну особь была достаточно малой (порядка 0,05). Если таким разведенным инокулятом засевается много пробирок, то по теории вероятности можно вычислить, что в 95% всех засеянных пробирок не попадет ни одной клетки.
По одной особи попадает в 4,8% пробирок, по две—в 0,12% пробирок, а в 0,002 всех засеянных пробирок окажется по три особи. Поэтому, если в пробирке что-то выросло, то скорее всего этот рост обусловлен попаданием в нее всего лишь одного организма.
Вероятность этого составляет Вероятность того, что рост вызван попаданием в пробирку лишь одного организма, очень быстро падает с увеличением среднего числа организмов (клеток) в инокуляте. Поэтому важно, чтобы выделение производилось из той серии пробирок, где в подавляющем большинстве случаев вообще не обнаруживается роста.
0.048/(0.048 + 0,0012 + 0,00002)=0.975
НЕДОСТАТКИ МЕТОДА
Метод разведений, однако, имеет один существенный недостаток. Его можно использовать для выделения только тех организмов, которые численно преобладают в смешанной популяции микробов.
Им нельзя с успехом пользоваться для выделения более крупных микроорганизмов, неспособных развиваться на твердой среде (например, простейших или водорослей), так как в природных популяциях бактерии, как правило, сильно превосходят их по численности. Это ограничивает применимость метода разведений.
АЛЬТЕРНАТИВА
Если нельзя использовать ни метод разведений, ни метод высева на чашки, то остается только одно — прибегнуть к контролируемому под микроскопом выделению из смешанной популяции отдельной клетки или организма. Такая процедура называется выделением отдельной клетки.
Техническая трудность ее обратно пропорциональна размерам выделяемого организма. Этот метод относительно прост, если микроорганизм обладает крупными клетками, например при работе с водорослями или простейшими, но пользоваться им для выделения бактерий гораздо сложнее.
В случае крупных микроорганизмов нужно захватить отдельный индивидуум в тонкую капиллярную пипетку, а затем только промыть его несколько раз в относительно больших объемах стерильной среды, чтобы удалить примесь мелких микробов. Эти операции производят вручную, контролируя их визуально при относительно небольшом увеличении, например используя препаровальную лупу.
Если выделяемый организм столь мал, что его трудно рассмотреть при увеличении менее 100, то применять капилляр уже нельзя, так как при больших увеличениях невозможно достаточно тонко манипулировать им вручную. В этом случае пользуются особым механическим устройством — микроманипулятором— и специально изготовленными очень тонкими стеклянными инструментами.
Назначение микроманипулятора состоит в том, чтобы уменьшить амплитуду движений, производимых вручную; это позволяет в небольшом рабочем пространстве (микрокапле) при постоянном .наблюдении в микроскоп (Х500—1000) осуществлять очень малые и точно контролируемые перемещения инструментов.
Вас также заинтересует это:
Comments (0)
Комментариев нет
Нет комментариев.
