04.05.2015
ПЕРВЫЕ ЧИСТЫЕ КУЛЬТУРЫ
Рубрика: МикромирАвтор: admin
В первоначальной разработке метода чистых культур многое было сделано Брефельдом, который занимался грибами.
Брефельд ввел в практику метод выделения отдельных клеток и культивирование грибов на твердых средах, для чего он добавлял к используемой им среде желатину.
Примененные им методы получения чистых культур давали прекрасные результаты при работе с грибами, но оказалось, что ими нельзя пользоваться при работе с имеющими меньшие размеры бактериями.
Работа с бактериями требовала других методов. Одним из первых был предложен метод разведения. Жидкость, содержащую смесь бактерий, разводили стерильной средой, надеясь на то, что в конце концов можно будет получить культуру, возникшую из одной-единственной клетки.
ТРУДНОСТИ МЕТОДА
На практике этот метод утомителен, труден и ненадежен. Кроме того, с его помощью в лучшем случае можно выделить в чистом виде лишь тот микроорганизм, который преобладал в исходной смеси.
Кох очень быстро понял, что для развития новой науки жизненно необходимо разработать простые методы получения чистых культур. Метод разведения явно был слишком трудоемок и ненадежен, чтобы его можно было использовать в повседневной работе.
Более перспективный подход намечался в результате наблюдений, сделанных ранее И. Шрётером. Этот исследователь обратил внимание, что на таких субстратах, как картофель, клейстер, хлеб или яичный белок, бактерии вырастают в виде отдельных скоплений, или колоний.
Колонии отличались друг от друга, но в пределах каждой колонии все бактерии были однотипными. Сначала Кох использовал в своих опытах стерильные срезы картофеля, которые он помещал в стерильные, накрытые крышкой стеклянные сосуды и засевал бактериями.
Однако картофель явно не подходил для этой цели: поверхность среза оказывалась влажной, и это позволяло подвижным бактериям свободно распространяться по ней; кроме того, этот субстрат непрозрачен, и поэтому колонии часто трудно было разглядеть; и наконец, что самое важное, для многих бактерий картофель является плохой питательной средой.
ЖЕЛАТИН
Кох понял, что было бы гораздо лучше подобрать какое-нибудь прозрачное вещество, способное сделать твердыми уже испытанные в работе жидкие среды. Таким способом можно было бы приготовить полупрозрачный гель, на котором хорошо выявлялись бы вырастающие колонии.
В то же время, изменяя состав жидкой основы, можно было бы удовлетворять пищевые потребности самых разных бактерий. Исходя из этих соображений, Кох в качестве гелеобразователя использовал желатину. После того как желатина застынет, ее поверхность засевали небольшим количеством бактериальных клеток (инокулятом).
Для этого инокулят брали платиновой петлей, простерилизованной в пламени, и затем быстро и без нажима проводили ею несколько раз по поверхности застывшей желатины. Вскоре на поверхности появлялись отдельные колонии бактерий, каждую из которых можно было очистить, повторив такой рассев. Этот метод выделения бактерий получил название метода рассева штрихом.
Затем чистые культуры переносили в закрытые ватой пробирки, содержащие стерильную питательную среду с желатиной, которая застыла, когда пробирка находилась в наклонном положении. Такие культуры получили название косяковых.
ГЛУБИННЫЙ ПОСЕВ
Вскоре после этого Кох обнаружил, что можно не рассевать бактерии штрихом по поверхности уже застывшей желатины, а смешивать их с расплавленной желатиной. Когда желатина застынет, бактерии будут иммобилизованы в ней и также дадут начало отдельным колониям. Этот метод получил название глубинного посева.
Желатина, вначале использованная Кохом для приготовления твердых сред, имела ряд недостатков. Это белок, который очень легко расщепляется микробами и в результате этого разжижается. Кроме того, гель желатины превращается в золь при температуре выше 28 °С.
АГАР
Вскоре стали использовать в качестве отвердителя другое вещество — агар, сложный полисахарид, который выделяют из красных водорослей. Чтобы расплавить агар, нужно нагреть его до 100 С, так что он остается твердым во всем диапазоне температур, при которых выращивают бактерии. Однако, будучи расплавлен, агар остается жидким до тех пор, пока температура не упадет примерно до 44 С.
Это дает возможность использовать его для глубинного посева. Агар образует достаточно твердый и прозрачный гель. Кроме того, он представляет собой сложный углевод, разрушать который могут лишь относительно немногие бактерии, так что редко приходится сталкиваться с его разжижением.
Поэтому агар быстро заменил желатину как материал для приготовления твердых бактериологических сред. Попытки найти столь же совершенный синтетический заменитель агара успеха не имели.
Вас также заинтересует это:
Comments (0)
Комментариев нет
Нет комментариев.
