08.08.2012
ПАРВОВИРУСНАЯ БОЛЕЗНЬ СВИНЕЙ
Рубрика: БолезниАвтор: admin
ПАРВОВИРУСНАЯ БОЛЕЗНЬ СВИНЕЙ
(обзор иностранной литературы]
Контагиозная вирусная болезнь клинически проявляется только у супоросных свиноматок и характеризуется гибелью эмбрионов и плодов, рождением мумифицированных плодов, мертвых и слабых поросят, уменьшением числа поросят в помете и реже абортами.
У животных других половозрастных групп, включая поросят-гнотобионтов и хряков-производителей, болезнь протекает в латентной форме.
Связь парвовируса свиней с нарушением воспроизводительной функции свиноматок в естественных условиях впервые была установлена в 1967 году в Великобритании, однако болезнь была воспроизведена экспериментально только спустя десять лет. Заражение супоросных свиноматок выделенными штаммами парвовируса свиней приводило к гибели и мумификации плодов [2, 5, 7].
В настоящее время парвовирусная болезнь свиней установлена в США, Канаде, Бразилии, Австралии, Японии, Новой Зеландии, на Филиппинах, в Южной Африке, Швейцарии, Швеции, Ирландии, Нидерландах, ФРГ, Дании, Норвегии, Бельгии, Франции, Италии, Испании, Мексике, Греции, Финляндии, Венгрии, Чехословакии, Югославии, Польше [7, 16].
Вероятно, и ранее болезнь была широко распространена в свиноводческих хозяйствах многих стран, но ее не диагностировали, поскольку не были разработаны лабораторные методы диагностики.
Болезнь причиняет значительный экономический ущерб. При возникновении ее в ранее благополучных хозяйствах рождение живых поросят на одну свиноматку в год снижается на 50—60 %, в стационарно неблагополучных хозяйствах — на 10—20 %.
Серологическими исследованиями болезнь установлена в 80—100 % обследованных хозяйств США, Великобритании, Франции и Австралии [13, 15].
В SPF-хозяйствах также нередко от животных выделяют парвовирус. В Дании из 73 обследованных хозяйств, благополучных по инфекционным болезням, только в 7 не был выявлен парвовирус.
Возбудитель болезни — парвовирус свиней, который входит в состав рода Parvovirus семейства Parvoviridae. Вирионы парвовируса свиней представляют безоболочечные частицы кубической симметрии диаметром 20 нм;
диаметр сердцевины (core) равен 14—17 нм. Капсид состоит из 32 капсомеров.
Липидов, углеводов и ферментов в составе вирионов не обнаружено. Молекулярная масса полных вирионов составляет 5,3 мега-дальтон, коэффициент седиментации 105S, плавучая плотность в хлористом цезии 1,38— 1,395 г/см1.
Пустые вирионы имеют тот же диаметр, но меньшую плавучую плотность (1,305— 1,315 г/см1) и коэффициент седиментации (66S). Соотношение полных и пустых вирионов в различных препаратах варьирует, однако количество последних всегда превалирует [1].
Парвовирус свиней устойчив к действию различных физико-химических факторов. Он сохраняет инфекционность при рН 3—9 и температуре 37 «С в течение 1,5 ч, однако полностью инактивируется при рН 2 в тех же самых условиях.
Инфекционность вируса не снижается при рН 2,8 и температуре 4 °С в течение 18 ч. Вирус стабилен при 56 °С в течение двух дней, при 70 °С — 2 ч и инактивируется при 80 °С в течение 5 мин. Он не теряет инфекционность в культуральной жидкости с 20 % фетальной сыворотки коров при 35— 37 °С в течение 15 нед [7].
Парвовирус свиней устойчив к хлороформу, эфиру и фреону в 10—50 % концентрации в течение 10—30 мин при комнатной температуре, дезоксихолату натрия (0,01 — 0,1 %) в течение часа при 37 °С, этанолу (10—40 %) в течение 0,5—2 ч при 4—20 °С.
Обработка трипсином в конечной концентрации 0,05 % в течение часа при 37 «С приводит к увеличению инфекционности вируса. Трипсин в концентрации 0,1—0,5 % незначительно снижает инфекционность вируса. Вирус нечувствителен к действию пепсина и па-паина в течение 18 ч при 37 °С [7, 11].
Вирус не приобретает повышенной термостабильности в присутствии 1 М раствора хлористого натрия. При минус 20 °С он не снижает инфекционной активности в течение 12 мес. Инактивируется ультрафиолетовыми лучами, формалином, этиленимином и его производными, бета-пропиолактоном и глу-таральдегидом.
Эффективными дезинфектантами для парвовируса свиней являются 3 %-ный раствор гипохлорита натрия, 8 %-ный раствор формальдегида и 5 %-ный раствор едкого натра, которые инактивируют вирус в течение 5— 20 мин при комнатной температуре [1].
В вирионах парвовируса свиней содержится односпиральная линейная минус-ДНК с молекулярной массой 1,4 мегадальтон и плавучей плотностью в хлористом цезии 1,724 г/см3. ДНК имеет коэффициент седиментации 24S и составляет 26,5 % массы вириона. Она упакована в капсид, состоящий из трех белков с молекулярной массой 83, 64 и 60 килодальтон (кД). Белки составляют 73,5 % массы вириона.
В полных вирионах в наибольшем количестве присутствует белок 60 кД, а в пустых вирионах — белок 64 кД. Белок 60 кД, вероятно, является продуктом расщепления белка 64 кД в период созревания вирио-нов. Высокомолекулярный белок 83 кД содержится в обоих типах вирионов в равном количестве (около 10 %). С помощью пептидного картирования установлено, что все три структурных белка парвовируса свиней сходны по первичной структуре [8].
Изучение антигенных свойств изолированных индивидуальных вирионных белков парвовируса свиней показало, что антисыворотка к каждому структурному белку нейтрализует инфекционную активность полных вирионов и взаимодействует со всеми тремя структурными белками этого вируса.
Каждый индивидуальный белок парвовируса свиней взаимодействует с вируснейтрали-зующими антителами, полученными на введение полного вируса. Предполагают, что ви-руснейтрализующие антигенные детерминанты имеются на всех вирионных белках парвовируса свиней [8].
Геномная ДНК парвовируса свиней состоит примерно из 5000 нуклеотидов и кодирует четыре белка — три структурных и один неструктурный. На обоих концах ДНК имеются неидентичные самокомплементарные последовательности нуклеотидов (палиндромы), которые образуют двухспиральные шпильки, резистентные к перевариванию нук-леазой SI; З’-концевая шпилька состоит из 85 нуклеотидов, а 5′-концевая — из 150 нуклеотидов.
Шпилечные структуры играют важную роль в репликации ДНК. Гены, кодирующие структурные белки, расположены в правой (5′-концевой) половине ДНК и составляют примерно 60 % вирусного генома, а ген, кодирующий неструктурный белок, находится в левой (З’-концевой) половине ДНК и составляет около 40 % вирусного генома.
Проведен сравнительный анализ репликативных форм ДНК вирулентного и аттенуи-рованного штаммов парвовируса свиней. Реп-ликативная форма ДНК вирулентного штамма представлена одним видом и имеет длину примерно 5000 пар нуклеотидов.
У аттенуированного штамма обнаружены два вида репликативной формы ДНК, состоящих из 5000 и 4700 пар нуклеотидов. Полноразмерные репликативные формы ДНК у обоих штаммов имеют идентичные рестрик-ционные карты и обладают инфекцион-ностью. Короткий вид репликативной формы ДНК у аттенуированного штамма содержит делецию в 300 пар нуклеотидов в области, кодирующей структурные белки, и не обладает инфекционностью [5].
Различные штаммы парвовируса свиней сходны по антигенной структуре и не имеют антигенного родства с парвовирусами крупного рогатого скота, лошадей, гусей, кроликов, крыс, вирусами энтерита и алеутской болезни норок, панлейкопении кошек, мелким вирусом собак и мелким вирусом мышей.
В реакциях нейтрализации и торможения гемагглютинации и методом флуоресцирующих антител установлена слабовыраженная антигенная связь между парвовирусами свиней и собак [7].
Парвовирус свиней обладает выраженной антигенной активностью и индуцирует у свиней, кроликов и морских свинок синтез нейтрализующих, комплементсвязывающих, преципитирующих и подавляющих гемагглю-тинацию антител. Он агглютинирует эритроциты морской свинки, цыпленка, кошки, крысы, мыши, обезьяны, человека и не агглютинирует эритроциты барана, лошади, свиньи, крупного рогатого скота, собаки, кролика, хомяка и утки.
Гемагглютинирующая активность парвовируса свиней проявляется в различной степени по отношению к эритроцитам разных видов животных. Наивысшие титры гемагглютинации получают при температуре 4 «С с эритроцитами морской свинки. В качестве разбавителя используют фосфатно-буферный раствор, рН 7,2. Гемагглютинирующей активностью обладают полные, неполные и разрушенные вирусные частицы.
Парвовирус свиней, адсорбированных на эритроцитах, не десорбируется с них при температуре 37—40 °С в течение часа, однако в щелочном буфере (рН 9) он полностью элюирует с них в течение 30 мин при комнатной температуре. Такие эритроциты повторно агглютинируются парвовирусом свиней и другими гемагглютинирующими вирусами [7, 11].
Вирус хорошо размножается в первичных культурах клеток почек, щитовидной железы и тестикул поросят, а также в некоторых перевиваемых культурах клеток свиней (ППК, РК-15, БТ). В перевиваемой культуре клеток СПЭВ парвовирус свиней практически не размножается.
Многие штаммы перевиваемых культур клеток человека Не1а, НЕр-2, КВ, Р1—Атпюп оказались контаминированными парвовирусом свиней. Вероятно, вирус в эти культуры клеток был занесен с трипсином, используемым для пересева клеток и полученным из поджелудочной железы инфицированных свиней. Выделение парвовируса свиней из коммерческой партии трипсина подтверждает эту гипотезу и свидетельствует о высокой устойчивости вируса к действию различных факторов в процессе приготовления препарата.
Контаминированные культуры клеток можно освободить от вируса путем серийного пассирования их в присутствии специфической антисыворотки в ростовой среде [7, 11].
Парвовирус свиней интенсивно размножается в делящихся клетках, в связи с этим заражение их проводят перед посевом или в период логарифмического роста (30—50 % монослоя). Для размножения вируса требуются компоненты ДНК-синтезирующего аппарата клетки-хозяина, в частности ДНК-полимеразы, которые синтезируются в Б-фазе клеточного цикла.
Размножение вируса в первичных и перевиваемых культурах клеток сопровождается развитием цитопатического эффекта (ЦПЭ), который характеризуется диффузной зернистостью и округлением клеток, отделением их от стекла и частичным или полным разрушением монослоя.
Полный ЦПЭ наблюдается в том случае, если все делящиеся клетки инфицированы вирусом. При небольшой дозе заражения ЦПЭ развивается только после субкультивирования инфицированных клеток. В зараженных клетках обнаружены внутриядерные включения типа А, состоящие из вирусного антигена [7].
Патогенность. В естественных и экспериментальных условиях к парвовирусу свиней чувствительны только свиньи. Попытки адаптации вируса к куриным эмбрионам, новорожденным хомячкам и мышам закончились безрезультатно. У небеременных животных, включая поросят-гнотобионтов, парвовирус свиней интенсивно размножается в различных органах и тканях и выделяется во внешнюю среду, однако клинические признаки болезни не развиваются.
Роль парвовируса свиней в нарушении воспроизводительной функции свиноматок была изучена путем заражения их в различные сроки супоросности. При заражении свиноматок через рот и нос (естественный путь инфицирования свиней в хозяйстве) парвовирус проникает через плаценту у 73—78 % животных независимо от срока супоросности. Однако после трансплацентарного прохождения вируса гибель плодов зависит от их возраста.
У свиноматок, зараженных в первой половине супоросности (0—44 дня), гибель плодов происходит во всех инфицированных пометах. У свиноматок, зараженных в середине срока супоросности (56 дней), мертвые плоды обнаружены у 71 %.
Заражение свиноматок во второй половине супоросности (67—80 дней) не сопровождалось гибелью плодов. Установлено, что трансплацентарное инфицирование плодов происходит через 10—15 дней после естественного заражения свиноматок [7].
Введение вируса в аллантоисную или ам-ниотическую полости плодов в 34—62-дневном возрасте приводит к их гибели. Инфицирование плодов в 70—101-дневном возрасте не сопровождается их гибелью, поскольку они в этом возрасте синтезируют антитела, нейтрализующие вирус.
Патогенное действие парвовируса свиней при заражении супоросных свиноматок проявляется только в том случае, если вирус проникает в плоды до развития у них им-мунокомпетентности (примерно до 70-дневного возраста).
Эпизоотологические данные. Источник возбудителя инфекции — больные и переболевшие свиноматки, выделяющие вирус с фекалиями, мочой, плацентой, абортированными и мертворожденными плодами. В естественных условиях заражение животных происходит пероральным и аэрогенным путями, а также при случке и искусственном осеменении инфицированной спермой.
С фекалиями вирус выделяется до двух недель после экспериментального перораль-ного заражения свиней; в животноводческих помещениях он сохраняет инфекционность в течение 135 дней. Обнаружение вируса в вагинальной слизи свиноматок и сперме хряков-производителей свидетельствует о возможности передачи вируса половым путем [4, 15].
В благополучные хозяйства парвовирус сви^ ней заносится с ремонтными свинками и хряками (вирусоносителями), инфицированной спермой и др. Вирус, занесенный в благополучное хозяйство, в течение 2—3 мес поражает практически всех животных [7, 15].
Быстрое поражение всех свиней в хозяйстве обусловлено выделением большого количества вируса с фекалиями инфицированных животных в первые 1—2 нед после заражения и высокой устойчивостью его во внешней среде.
Поросята, рожденные от инфицированных свиноматок, приобретают пассивный иммунитет с молозивом, который сохраняется до 5— 6 мес. Такая продолжительность пассивного иммунитета связана с тем, что поросята в первые сутки жизни получают с молозивом большое количество антител, которые всасываются в кишечнике и через лимфатические пути попадают в кровь.
У поросят на второй день жизни титр антител в сыворотке крови достигает высокого уровня. Период полураспада антител равен примерно трем неделям. В связи с этим у поросят с титром антител 1:1024 пассивный иммунитет заканчивается только к 6-месячному возрасту [4].
В стационарно неблагополучных по парво-вирусной болезни свиней хозяйствах нарушение воспроизводительной функции чаще наблюдается у ремонтных свинок, чем у основных свиноматок. Многие основные свиноматки в результате неоднократного естественного инфицирования парвовирусом становятся иммунными и супоросность у них протекает нормально.
Клинические признаки. Болезнь клинически проявляется только у супоросных свиноматок. В первую неделю после заражения у них отмечают легкую лейкопению и иногда кратковременное повышение температуры. В этот период вирус может быть выделен из крови и тканей с резко выраженной пролиферативной активностью. В период виремии вирус проходит через плаценту и инфицирует эмбрионы или плоды [15].
В оплодотворенные яйцеклетки и ранние эмбрионы, содержащие прозрачную оболочку, вирус не проникает. Ранние эмбрионы инфицируются после удаления этой оболочки и имплантации в слизистую матки. Заражение всех эмбрионов в этот период приводит к их гибели и полной резорбции с последующим наступлением охоты у свиноматок.
При заражении и гибели части эмбрионов супоросность протекает нормально, но уменьшается число поросят в помете. Полная резорбция эмбрионов происходит в том случае, если они погибают в первые 30— 36 дней супоросности. После этого срока начинается плодная фаза развития, характеризующаяся кальцификацией скелета и невозможностью полной резорбции плода. Заражение и гибель плодов в этот период приводят к их мумификации [7, 17].
Распространение вируса в матке происходит медленно, в связи с этим плоды погибают на различных сроках супоросности. Обычно не все плоды поражаются вирусом, и при опоросе наблюдают рождение мумифицированных плодов различной величины, мертвых, слабых и нормальных поросят. Аборты у зараженных свиноматок происходят редко, и они не являются характерным признаком данной болезни.
У хряков-производителей болезнь протекает бессимптомно и не сопровождается нарушением спермиогенеза и морфологии спермиев. Уровень тестостерона и эстрогена в крови в пределах нормы, что свидетельствует о нормальном функционировании интерстициальных сертолиевых клеток.
В последнее время парвовирус свиней выделен из содержимого тонких кишок поросят 2—3-недельного возраста с синдромом диареи, а также из органов и тканей поросят с некротическими и везикулярными поражениями в ротовой полости, на языке, пятачке, венчике и межпальцевых пространствах [3, 6].
Однако для доказательства роли парвови-руса свиней в возникновении диареи и везикулярных поражений у поросят-сосунов необходимы дополнительные исследования.
Патологоанатомические изменения. У несупоросных свиноматок макро- и микроскопических изменений в тканях и органах не обнаружено. Макроскопические изменения также отсутствуют у супоросных свиноматок, зараженных в различные сроки супоросности. Однако микроскопически у них находят фокальные скопления мононуклеарных клеток в эндометрии и миометрии и периваскуляр-ные муфты из лимфоидных и плазматических клеток в головном и спинном мозге [7],
У плодов, инфицированных до периода им-мунокомпетентности, макроскопически видны задержка роста, отек, геморрагии, скопление серозно-кровянистой жидкости в полостях и дегидратация (мумификация), рельефность сосудов ярко выражена.
Многие из этих изменений встречаются в плаценте. Микроскопически отмечают обширные зоны некроза во многих тканях и органах плодов и внутриядерные включения.
У плодов, зараженных после наступления иммунокомпетентности, обнаруживают только микроскопические изменения (инфильтрацию мононуклеарными клетками), свидетельствующие об иммунном ответе на вирус. У мертворожденных поросят и живых плодов, полученных на поздних стадиях супоросности, отмечают менингоэнцефалит [7, 16].
Диагностика. На наличие в хозяйстве парво-вирусной болезни свиней указывают признаки нарушения воспроизводительной способности свиноматок, однако окончательный диагноз ставят на основании результатов лабораторных исследований. Наиболее часто используют реакцию торможения гемагглюти-нации (РТГА) [5, 15].
От свйнок с нарушением воспроизводительной функции исследуют 10—15 проб сыворотки крови в РТГА. У большинства инфицированных животных специфические антитела содержатся в высоком титре (1:512— 1:8192).
Обработка сывороток крови 2 М раствором 2-меркаптоэтанола приводит к разрушению иммуноглобулинов класса М и не влияет на иммуноглобулины класса О. Разрушенные иммуноглобулины М не выявляются в РТГА. Снижение титра антител в сыворотке крови в 16 раз и более после обработки их 2-меркаптоэтанолом говорит о том, что после заражения животного парвовирусом прошло не более 20—40 дней [5].
Выявление антител в сыворотке крови плодов после 70-дневного возраста и новорожденных поросят до приема молозива свидетельствует о внутриутробном заражении. Для обнаружения антител у мертворожденных поросят берут транссудат из грудной и брюшной полостей [7, 15].
Для ретроспективной диагностики парво-вирусной болезни свиней также применяют реакцию нейтрализации (РН), метод флуоресцирующих антител (МФА), встречный имму-ноэлектрофорез (ВИЭФ), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию диффузионной преципитации (РДП) и иммунофермент-ный метод. Однако по сравнению с РТГА эти реакции используются реже [10, 14].
Обнаружение антител к парвовирусу свиней в жидкости грудной полости абортированных плодов с помощью РТГА, МФА и ВИЭФ показало, что МФА является наиболее чувствительным тестом [12].
Абортированные плоды до наступления иммунокомпетентности используют для выявления парвовирусного антигена в реакции ге-магглютинации (РГА). Для этого из внутренних органов плода готовят 20—30 %-ную суспензию, которую центрифугируют 20 мин при 1000 об/мин, и надосадочную жидкость исследуют в РГА с эритроцитами морской свинки.
Плоды после наступления иммунокомпетентности непригодны для обнаружения вирусного антигена в РГА, поскольку у них в тканевой жидкости содержатся антитела, которые при приготовлении суспензии связываются с антигеном и препятствуют его выявлению. Вирусный антиген чаще обнаруживают в мумифицированных плодах; с помощью МФА — в срезах тканей плодов. При отсутствии у плода антител антиген выявляют во всех внутренних органах, в присутствии антител — только в легких пло-
Да [7].
Выделение парвовируса свиней считается менее пригодным и надежным диагностическим тестом, чем упомянутые выше. Во-первых, выделить вирус из погибших плодов удается не всегда; во-вторых, из-за устойчивости парвовируса существует постоянная угроза лабораторного заражения исследуемого материала и культур клеток.
Кроме того, первичные культуры, используемые для выделения вируса, могут быть приготовлены из тканей плодов и поросят, инфицированных парвовирусом [7].
В последнее время для выявления парвовируса свиней в абортированных плодах используют метод иммуноэлектронной микроскопии. Этот метод оказался более чувствительным, чем МФА, РГА и выделение вируса [18].
Дифференциальная диагностика. Парвови-русную болезнь свиней следует дифференцировать от других инфекционных и незаразных болезней, сопровождающихся нарушением воспроизводительной способности свиноматок. Указанные выше лабораторные методы исследований позволяют поставить диагноз на парвовирусную болезнь свиней.
Профилактика и меры борьбы. Профилактика болезни в хозяйствах, свободных от парвовирусной болезни, основывается на охране их от заноса возбудителя инфекции. Комплектуют такие хозяйства свиньями из благополучных по данной болезни хозяйств с обязательным серологическим обследованием в период 30-дневного профилактического карантинирования.
Специфическая профилактика парвовирусной болезни свиней в ряде стран (США, Великобритания, Франция, Дания, Бельгия, Швеция, Нидерланды, Испания, Япония, Австралия) осуществляется с помощью инакти-вированных вакцин, которые обладают достаточной эффективностью и защищают свиноматок от инфицирования и трансплацентарной передачи вируса.
В США разработаны ассоциированные вакцины против парвовирусной болезни и болезни Ауески; парвовирусной болезни и леп-тоспироза; парвовирусной болезни, лептоспи-роза, рожи и пастереллеза [7, 9].
При появлении в хозяйстве парвовирусной болезни свиней всех свиноматок, хряков-производителей и поступающих ремонтных свиней вакцинируют. Помещение и инвентарь дезинфицируют 3 %-ным раствором гипохлорита натрия или 5 %-ным раствором едкого натра. Мертвые, мумифицированные и абортированные плоды и плаценту термически обрабатывают или сжигают.
Б. Г. ОРЛЯНКИН, В. А. СЕРГЕЕВ, В. А. СЕДОВ
1. Brown T. Amer J. vet. Res., 1981, 42,—
2. Cartwright S. et a!. Vet Rec., 1967, 81.—
3. Dea S. et al. Can. J. comp. Med., 1985, 49,—
4. Johnson R. et al. Aust. vet., J., 1976, 52,—
5. Joo H, et a!. Arch Virol., 1976, 51; Austr. vet J., 1976, 52; 1978, 54.—
6. Kresse J. et al. Vet. Microbiol., 1985, 10,—
7. Mengeling W. et al. Disease of swine, 1975; 1981; Amer. J. vet Res., 1978, 39; 1976, 37; 1981, 42; 1983, 44,—
8. Molitor T. et al. J. Virol., 1983, 45; 1984, 137,—
9. Nat. Hog Farm., 1984, 29.—
10. Ruckerbauer G. et al. Can. J. comp. Med., 1978, 42,—
1 1. Siegl G. Virol. Monogr., 1976, 15; I nterviroiogy, 1985, 23.—
12. Sorenser, K. Acta vet. Scand., 1980, 21,—
13. Stein T. et al. Int. Symp. Vet. Epid. Econom., 1983.—
14. Too H. et al. Austr. vet. J., 1983, 60 —
15. Ur-sache R. Revta Med. vet., 1983, 134—
16. Van Le-engoed L. et al. Vet. Q„ 1983, 5—
17. Vanni-er P. L’eleveur de pores, 1983, 150.—
18. Zano-ni R. et al. Zentbl. Vet. Med., 1984, B31.
Вас также заинтересует это:
Comments (0)
Комментариев нет
Нет комментариев.
