07.10.2013
Вирус гриппа птиц
Рубрика: ПтицаАвтор: admin
ПРИМЕНЕНИЕ
МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ АНТИГЕННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В ГЕМАГГЛЮТИНИНЕ Н7 ВИРУСОВ ГРИППА ПТИЦ
Р. Я. ПОДЧРНЯЕВА, В. В. СКОВОРОДКА
Институт вирусологии имени Д. И, Ивановского АМН СССР
С помощью моноклональных антител можно установить с большой точностью степень антигенного родства между отдельными штаммами и выявить различия между ними (Вебстер и соавт., 1979; Кида и соавт., 1982; Шилд и соавт., 1983; Кильбурн и соавт., 1983). В настоящем сообщении приведены результаты исследований, проведенных в этом направлении.
Материалы и методы. Использовали штаммы вируса гриппа, изолированные в период с 1934 по 1980 год, от птиц различных видов и животных и относящиеся по классификации гемагглютинина к подтипу Н7:
А/ВЧП/Росток/34(Н71N1),
А/ВЧП/Вейбридж/ 34(Н7N7),
А/индюк/Англия/63(Н7NЗ),
А/индюк/Орегон/71 (Н7NЗ),
А/попугай/Улстэр/73 (Н7N1),
А/цыпленок/Виктория/75 (Н7N7),
А/индюк/Англия/77/Н7N7),
А/тюлень/Массачусетс/80 (Н7N7).
Моноклональные антитела были получены в лаборатории д-ра Вебстера в культурах гибридомных клеток, индуцирующих антитела к гемагглютинину штамма А/тюлень/ Массачусетс/80.
Результаты исследования. Антигенные связи, выявленные с помощью моноклональных антител (3/5, 8/4, 14/3, 55/3, 38/3, 71/4, 81/6, 105/2) в РТГА, приведены в таблице 1.
Штамм А/тюлень/Массачусетс/80 нейтрализовали в высоком титре только 4 варианта моноклональных антител (8/4, 46/2, 55/3, 58/3).
|
Таблица 1 Титры • РТГА с моноклональными антителами к гемаглютинину штамма А/тюлень/Массачусетс/80 |
| Штаммы | Антигенная формула | Моноклональные | антитела | |||||||
| 3/5 | 8/4 | 14/3 | 46/2 | 55/3 | 58/3 | 71/4 | 81/6 | 105/2 | ||
| А/ВЧП/Росток/27 | H7N7 | 100 | 100 | 100 | 100 | 3200 | 25 000 | 100 | 100 | 100 |
| А/ВЧП/Вейбридж/34 | Н7N7 | 100 | 100 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 6400 | 100 | 100 |
| А/индюк/Англия/63 | Н7N3 | 100 | 100 | 800 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 12 800 | 100 | 100 |
| А/индюк/Орегон/71 | Н7N3 | 25 000 | 25 000 | 3200 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 3200 | 25 000 |
| А/попугай/Улстэр/7З | Н7М | 100 | 100 | 100 | 3200 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| А/цыпленок/Виктория/75 | Н7N7 | 100 | 400 | 100 | 100 | 25 000 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| А/индюк/Англия/77 | Н7N7 | 100 | 100 | 6400 | 25 000 | 100 | 1600 | 25 000 | 100 | 100 |
| А/тюлень/Массачусетс/80 | Н7N7 | 100 | 25 000 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 400 | 100 | 100 |
Если рассматривать антигенные связи изучаемых вирусов в зависимости от времени с момента изоляции, выясняется, что штамм А/ВЧП/Росток/34, изолированный от кур в 1934 году и являющийся одним из родоначальных, обладающих гемагглютинином 7-го типа, сохранил антигенное родство со штаммом А/тюлень/Массачусетс/80 только по одной детерминанте, активно взаимодействуя с одним (58/3) вариантом моноклональных антител.
Гемагглютинин другого штамма — А/ВЧП/Вейбридж/34, выделенного в том же году, оказался родствен с гемагглютинином штамма А/тюлень/Массачусетс/80 еще по трем (46/2, 55/3, 71 /4) детерминантам.
Изолированный от индюков в Англии, спустя 29 лет после штамма А/ВЧП/Вейб-ридж/34, штамм А/индюк/Англия/63 сходен с ним по тем же антигенным детерминантам. В США, спустя 8 лет после этого, от индюков был изолирован штамм А/индюк/ Орегон/71, гемагглютинин которого не только антигенно родствен гемагглютинину штамма А/тюлень/Массачусетс/80 по основным 5(8/4, 46/2, 55/3, 58/3, 71/4) детерминантам, но значительно активнее гомологичного штамма реагирует с остальными моноклональными антителами.
— Выделенный от попугаев двумя годами позже, штамм А/попугай/Улстэр/73 сохранил частичную антигенную взаимосвязь со штаммом А/тюлень/Массачусетс/80 только по одной (46/2) детерминанте, а штамм А/цыпленок/Виктория/75 — по двум (8/4 и 55/3) детерминантам.
В 1977 году от индюков в Англии был выделен еще один штамм — А/индюк/Англия/77, родственный с двумя другими штаммами, изолированными от этого же вида птиц, по 4(14/3, 46/2, 58/3, 71/4) детерминантам, утративший с ними родство по детерминанте 55/3 и значительно отличающийся от штамма А/тюлень/Массачусетс/80 по взаимодействию с 5 моноклональными антителами (8/4, 14/3, 55/3, 58/3, 71/4).
Таким образом, относительно штамма А/тюлень/Массачусетс/80 зависимости антигенной связи от времени, прошедшего с момента выделения штамма, и от вида хозяина, от которого изолирован тот или иной штамм (на примере трех штаммов, выделенных от индюков), не установлено. Не удалось выявить также зависимости титров от типа нейраминидазы, отмечаемой ранее (Джексон, Вебстер, 1982).
С нашей точки зрения, основную роль играет количество пассажей в том или ином хозяине, которое, к сожалению, не может быть проконтролировано в природе, а также гетерогенность, свойственная популяциям вируса гриппа и выявляемая при его пассировании (В. Т. Иванова и соавт., 1982).
Так, при пассировании штамма А/тюлень/Массачусетс/80 в системе куриных эмбрионов и изучении взаимодействия каждого клона в РТГА с моноклональными антителами у отдельных клонов наблюдали изменение степени взаимодействия с ними.
Кроме того, проверив хранившиеся в течение 4 мес (с марта по июнь 1983 года) при 4 °С отдельные клоны штамма А/тюлень/ Массачусетс/80 (I—IV) в реакции с моноклональными антителами (табл. 2), мы установили, что клон I от 14.3.83 взаимодействовал с вариантом моноклональных антител 71/4 в 8 раз активнее по сравнению с исходным вирусом, а клон 11 от 15.4.83 в 30 раз менее активно с вариантом 8/4 моноклональных антител.
Таблица 2
Титры в РТГА с моноклональными антителами отдельных клонов штамма А/тюлень/Массачусетс/80
| Клоны | Моноклональные | антитела | |||||||
| 3/5 | 8/4 | 14/3 | 46/2 | 55/3 | 58/3 | 71/4 | 81/6 | 105/2 | |
| I (от 14.0.83) | 100 | 12 800 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 6400 | 100 | 100 |
| 11 (от 15.4.83) | 100 | 800 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 200 | 100 | 100 |
| 111 (от 25.5.83) | 100 | 25 000 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 100 | 100 | 100 |
| IV (от 6.6.83) | 100 | 25 000 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 400 | 100 | 100 |
| Освеженный клон от 6.6.83 в разведении: | |||||||||
| 10-1 | 100 | 12 800 | 100 | 12 800 | 12 800 | 25 000 | 200 | 100 | 100 |
| 10-3 | 100 | 25 000 | 100 | 12 800 | 12 800 | 25 000 | 200 | 100 | 100 |
| 10-5 1 клон | 100 | 15 000 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 400 | 100 | 100 |
| 2 клон | 100 | 25 000 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 400 | 100 | 100 |
| 10-6 1 клон | 100 | 12 800 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 100 | 100 | 100 |
| 2 клон | 100 | 25 000 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 200 | 100 | 100 |
| 10-7 1 клон | 3200 | 25 000 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 800 | 400 | 400 |
| 2 клон х | 100 | 25 000 | 100 | 25 000 | 25 000 | 25 000 | 100 | 100 | 100 |
Следует отметить, что предварительно исходный штамм А/тюлень/Массачусетс/80 был четырежды клонирован методом предельных разведений и согласно общепринятому мнению можно было бы считать его генетически однородной популяцией.
Однако после освежения штамма (от 6.6.83) путем инфицирования куриных эмбрионов различными разведениями вируса (с 10-1 по 10-7) в РТГА с моноклональными антителами были выявлены существенные различия у одного клона из предельного (10-7) разведения, который приобрел способность взаимодействовать более активно с четырьмя вариантами моноклональных антител — 3/5, 71/4, 81/6 и 105/2.
Заключение. Приведенные данные свидетельствуют о том, что изучение антигенных взаимосвязей между отдельными штаммами вируса гриппа следует проводить лишь после селекции генетически однородной популяции, причем каждый штамм необходимо клонировать не менее пяти раз либо методом бляшек, либо методом предельных разведений.
Все штаммы вирусов гриппа должны иметь точно известную историю пассажей с учетом системы, в которой их проводят.
Вас также заинтересует это:
Comments (0)
Комментариев нет
Нет комментариев.
